流式细胞术实验指南

1实验步骤

1. 1样本制备：收集细胞（悬浮细胞直接收集，贴壁细胞用胰酶消化），PBS 洗涤 2 次
2. 2细胞计数：调整细胞浓度至 1×10⁶ - 1×10⁷ 细胞/mL
3. 3封闭：使用 FcR 封闭剂（1μg/10⁶ 细胞）室温封闭 10 分钟，减少非特异性结合
4. 4表面染色：加入荧光素标记的抗体，4℃避光孵育 30 分钟
5. 5洗涤：加入 PBS 1-2mL，300g 离心 5 分钟，弃上清，重复 1-2 次
6. 6死活染料：如需死活鉴定，加入 Zombie染料（1:1000 稀释），室温孵育 15 分钟
7. 7固定：如需固定，加入 4% PFA 室温固定 15 分钟
8. 8洗涤：固定后 PBS 洗涤 1 次
9. 9上机：重悬于 200-500μL PBS 中，用细胞滤网过滤（40μm），去除团聚
10. 10设置对照：单染对照（调节补偿）、FMO 对照（确定门的位置）、同型对照、空白对照