实验流程

从样本到 FCS 数据怎么走?

按步骤核对关键项,查看每步产出、站内工具与免费开源分析软件。

样本制备与计数

制备单细胞悬液,控制细胞活率、聚团、红细胞和碎片干扰。

核对项

  • 样本来源和处理时间已记录
  • 细胞活率和浓度已确认
  • 红细胞裂解或组织消化条件已规划
  • 过滤、洗涤和低温避光流程已准备

本步产出

  • 可上机单细胞悬液
  • 细胞浓度和活率记录
  • 样本制备耗材清单
选型决策

做流式前先确认什么?

对照下列决策点缩小抗体、荧光素、对照和样本制备试剂范围,再至产品中心筛选或查看分级选购建议。

1

抗体是否验证 Flow

优先选择明确标注 Flow/FCM 应用、样本物种和目标细胞类型的抗体。

2

仪器通道是否匹配

荧光素必须匹配仪器激光和滤光片;高参数 panel 需提前规划光谱重叠。

3

marker 表达强弱如何分配

低表达或关键分群 marker 优先分配 PE、APC、BV421 等高亮染料。

4

对照是否齐全

多色实验至少准备单染补偿;边界不清的 marker 需要 FMO,对非特异结合可加同型对照。

5

是否做胞内或分选

胞内染色需要固定通透体系;分选项目需关注无菌、低内毒素和分选级缓冲液。

Panel 光谱检查

荧光光谱与仪器通道

选择常用流式染料,结合预设仪器或手动激光/滤光片配置,快速查看激发、发射光谱与通道兼容性。

荧光光谱查看器

405+488+561+640nm|8通道
💡 不兼容染料显示红色标记

图表加载中...

已选 0/8 条光谱

紫光 (405nm)

绿光 (488nm)

黄绿 (561nm)

红光 (640nm)

远红 (640nm)

实验材料准备助手

流式细胞术材料准备

告诉我们样本量、上机批次和 panel marker 数,我们为您整理抗体、死活染、补偿/FMO、流式管、滤网与样本制备建议。

实验条件

用于判断样本制备、死活染、补偿、胞内染色和分选需求;不确定时保持默认即可。

样本类型

Panel 类型

实验阶段

基础信息

填写样本量与 panel 信息,我们会即时更新流式染色与对照材料建议。

上机批次

3 批

Panel marker

2 个

预计染色管

28 管

对照管

4 管

材料准备清单

14
  1. 1

    流式验证抗体(按 marker 分别选型)

    2

    按 2 个 marker 估算;需确认 Flow/FCM 应用、克隆号和荧光素。

  2. 2

    死活染料(Fixable viability dye 或 PI/7-AAD)

    1

    用于排除死细胞;固定通透实验需选择 fixable 版本。

  3. 3

    FACS Buffer / 染色缓冲液

    1

    常用 PBS + BSA/FBS + EDTA;用于染色、洗涤和重悬。

  4. 4

    流式管 / 5 mL 圆底管

    1

    按样本、单染补偿和对照共约 28 管估算。

  5. 5

    细胞滤网(40/70 μm)

    1

    上机前过滤单细胞悬液,降低聚团和堵针风险。

  6. 6

    补偿微球 / 单染补偿材料

    2

    每个荧光通道建议准备单染补偿,复杂 panel 尤其必要。

  7. 7

    FMO / 同型对照材料

    1

    用于判断门控边界和非特异背景;关键 marker 优先设置 FMO。

  8. 8

    Fc Block

    1

    免疫细胞样本建议加入,降低 Fc 受体介导的非特异结合。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手流式初购组合

适合第一次做流式检测,重点是把表面标志物抗体、死活染、缓冲液、滤网和对照管补齐。

必买

  • 流式验证抗体
  • 死活染料
  • FACS Buffer
  • 细胞滤网
  • 流式管

推荐配置

  • Fc Block
  • 单染补偿对照
  • 同型对照
  • 红细胞裂解液
  • 计数板或细胞计数试剂

可选升级

  • 预混 panel
  • 补偿微球
  • Fixable viability dye

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

流式结果不理想?

选择最接近的情况查看参考排查项;如需人工协助,建议保留 panel、补偿和 FCS 信息。

已勾选 0 / 4

信号弱 / 阳性群不清

阳性群和阴性群分不开,或目标 marker 信号接近背景。

常见原因

  • 抗体克隆或荧光素不适合该 marker
  • 抗体滴度过低或染色时间不足
  • 低表达 marker 分配了较暗染料
  • 样本处理导致抗原丢失或细胞状态差

可参考的核对项

调整建议

  • 更换 Flow 验证抗体或同克隆高亮荧光素
  • 补充阳性对照和死活染
  • 优化样本处理时间和温度
  • 低表达 marker 优先使用高亮通道

我们的建议

对照核对项自查后若仍存疑,请保留样本类型、抗体克隆号、荧光素、仪器通道、补偿设置和代表性 FCS/门控图,便于进一步协助。

推荐从“进阶流式初购组合”开始,重点补高亮抗体、阳性对照、死活染和补偿材料。

相关产品与资料

常见问题

流式抗体怎么选?

先确认 Flow/FCM 应用、物种、克隆号和目标细胞类型,再按仪器通道选择荧光素。

什么时候需要 FMO?

多色 panel 中边界不清、连续表达或低丰度 marker 建议设置 FMO,用于确定门控边界。

背景高先查什么?

先看死活染、无染/单染/FMO、Fc Block 和样本碎片聚团,再调整抗体滴度与洗涤。