实验流程

从蛋白样本到候选验证怎么走?

按步骤核对样本设计、蛋白制备、数据分析和候选蛋白验证。

样本设计与蛋白提取

明确分组、重复、样本量和裂解体系,避免去垢剂、盐和核酸干扰质谱。

核对项

  • 分组和生物学重复明确
  • 裂解液兼容质谱
  • 蛋白量和浓度满足要求
  • 样本随机化和批次记录完整

本步产出

  • 蛋白样本
  • 分组设计表
  • 裂解和定量记录

相关产品/工具

裂解液BCA 定量试剂
选型决策

蛋白组学项目前先确认什么?

对照定量策略、修饰富集、批次设计、公共数据归档和后续验证路径。

1

非标记还是标记定量

Label-free 更灵活,TMT/iTRAQ 更适合多样本批量比较,但对设计和批次要求更高。

2

是否做修饰组

磷酸化、泛素化等修饰组需要富集材料、更多起始量和对应验证路径。

3

候选蛋白如何验证

建议结合 WB、ELISA、PRM/SRM 或功能实验,避免只停留在发现阶段。

4

数据如何归档复用

保留原始谱图、数据库版本、搜索参数、定量矩阵和公共归档编号。

实验材料准备助手

Western Blot 材料准备

告诉我们样本量与跑胶安排,我们为您估算通用耗材与常备器材;一抗、二抗等核心试剂请自行选购。

实验条件

用于完善材料配置和质控判断;暂不确定时可保留默认设置。

样本类型

检测目标

实验阶段

基础信息

填写样本批次、靶标数量和验证方式,用于整理蛋白提取、酶解、脱盐和验证材料。

单胶可跑样本

8 个

检测目标数

2 个

预计胶数

6 块

预计膜数

6 张

材料准备清单

25
  1. 1

    预制 SDS-PAGE 胶(浓度按分子量选择)

    6

    每胶预留 2 个泳道用于 Marker/对照;大分子量建议低浓度胶。

  2. 2

    SDS-PAGE 电泳缓冲液(Running buffer)

    2

    10× 浓缩或预制液;每块胶约 1 L 1× 工作液。

  3. 3

    转膜缓冲液(Transfer buffer)

    2

    湿转/半干转按方法选择;含甲醇配方需现配现用。

  4. 4

    PVDF 膜(0.45 μm,需甲醇预活化)

    6

    低分子量或磷酸化蛋白也可选 NC 膜;按每胶一张估算。

  5. 5

    转膜滤纸(Whatman 3MM 或同等)

    24

    湿转 sandwich 每层 2 张,按转膜次数预留。

  6. 6

    转膜海绵垫 / 纤维垫

    2

    老化或压痕明显时更换,保证转膜压力均匀。

  7. 7

    预染蛋白 Marker(Broad/Plus)

    1

    每胶至少 1 个 Marker 泳道,用于分子量对照。

  8. 8

    2× SDS 上样缓冲液 + 还原剂(DTT/β-ME)

    1

    煮样 95–100°C 5 min;还原剂现加现用。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手蛋白组学与质谱初购组合

适合首次建立实验流程的团队,重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。

必买

  • 蛋白提取和裂解试剂
  • 蛋白定量试剂
  • 还原烷基化试剂
  • 胰蛋白酶
  • 肽段脱盐耗材

推荐配置

  • 磷酸化富集材料
  • 样本低吸附耗材
  • 质控标准品
  • Western Blot 验证抗体
  • LC-MS 级溶剂

可选升级

  • TMT/iTRAQ 标记
  • 靶向 PRM/SRM 验证
  • 翻译后修饰富集方案

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

质谱数据或候选验证不理想?

选择最接近的情况,查看常见原因、核对项和调整建议。

已勾选 0 / 4

酶解或上机质量差

鉴定数量低,漏切比例高,肽段分布异常或质控样本波动大。

常见原因

  • 样本污染或盐分高
  • 蛋白沉淀/去污不充分
  • 酶解条件不稳定
  • 肽段回收损失

核对项

调整建议

  • 优化样本清理
  • 统一还原烷基化和酶解条件
  • 加入质控标准品
  • 减少低吸附损失

处理建议

建议保留样本分组、裂解体系、酶解条件、数据库版本、搜索参数、定量矩阵和候选验证记录。

建议补齐质谱兼容裂解、定量、酶解、脱盐和质控标准品。

相关产品与资料

常见问题

蛋白组学项目最先确认什么?

先确认样本类型、分组重复、起始蛋白量、定量策略和后续验证方式。

发现结果是否必须验证?

建议验证关键候选蛋白,尤其是用于机制解释或论文核心结论的差异蛋白。

修饰组和普通蛋白组有什么不同?

修饰组通常需要更多起始量、富集步骤、位点级解释和总蛋白对照验证。