实验流程

从核酸到验证怎么走?

按步骤核对关键项,查看每步产出与相关产品入口。

样本与核酸提取

按样本类型选择 DNA/RNA/miRNA 提取方案,控制降解、污染和产量波动。

核对项

  • 样本来源、保存和冻融次数已记录
  • DNA、RNA 或 miRNA 类型已确认
  • RNase/DNase-free 操作材料已准备
  • 浓度、纯度和完整性检测方式已规划

本步产出

  • 可用于扩增的核酸模板
  • 浓度与纯度记录
  • 提取和纯化材料清单
选型决策

做分子实验前先确认什么?

对照下列决策点缩小提取、扩增、反转录、克隆和耗材范围,再至产品中心筛选或查看分级选购建议。

1

模板是 DNA 还是 RNA

DNA 项目关注纯度和抑制物;RNA 项目必须控制 RNase、反转录效率和完整性。

2

终点 PCR 还是 qPCR

终点 PCR 更适合片段确认;表达定量、拷贝数或低丰度检测优先 qPCR。

3

是否需要高保真扩增

克隆、突变或测序验证项目建议使用高保真酶,减少扩增引入突变。

4

是否做克隆或转染

克隆项目需提前准备纯化、连接/组装、感受态、筛选和测序;转染项目还需评估细胞状态。

5

污染控制是否到位

PCR/qPCR 对污染非常敏感,建议分区操作、滤芯吸头、阴性对照和模板后加样。

实验材料准备助手

分子生物学材料准备

告诉我们样本量、反应批次和靶标/构建数量,我们为您整理核酸提取、PCR/qPCR、反转录、电泳、纯化、克隆和无核酸酶耗材建议。

实验条件

用于判断提取、扩增、反转录、克隆和污染控制需求;不确定时保持默认即可。

模板类型

实验类型

实验阶段

基础信息

填写样本量、反应批次与靶标数量,我们会即时更新核酸实验材料建议。

实验批次

5 批

检测靶标

2 个

基础反应

48 个

总预估反应

67 个

材料准备清单

14
  1. 1

    DNA / PCR 产物提取纯化试剂盒

    1

    按 24 个样本估算;RNA 项目需全程 RNase-free 操作。

  2. 2

    PCR Master Mix / DNA Polymerase

    1

    按约 67 个反应估算,已包含对照和 15% 预留。

  3. 3

    引物 / 探针(按靶标或构建分别设计)

    2 对/套

    按 2 个靶标/构建估算;qPCR 建议同时确认扩增效率和熔解曲线。

  4. 4

    Nuclease-free 水

    1

    PCR/qPCR、反转录、引物稀释和阴性对照均需使用。

  5. 5

    滤芯吸头(10 / 200 / 1000 μL)

    1

    用于降低气溶胶污染;PCR/qPCR 建议固定专区使用。

  6. 6

    PCR 管 / 8 联管 / PCR 板

    1

    需匹配 PCR 仪模块规格。

  7. 7

    琼脂糖、凝胶染料和电泳缓冲液

    1

    用于终点 PCR、克隆片段和纯化前后确认。

  8. 8

    DNA 分子量标准 / Ladder

    1

    按片段大小选择 100 bp、1 kb 或宽范围 Marker。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手分子生物学初购组合

适合第一次搭建 PCR/qPCR 或基础核酸检测流程的实验室,重点是补齐提取、扩增、电泳和污染控制材料。

必买

  • 核酸提取试剂盒
  • PCR/qPCR Master Mix
  • 引物
  • Nuclease-free 水
  • 琼脂糖和 DNA Marker

推荐配置

  • 反转录试剂
  • PCR 管/板
  • 滤芯吸头
  • 凝胶染料
  • PCR 产物纯化试剂盒

可选升级

  • 热启动酶
  • 高保真酶
  • qPCR 专用耗材

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

扩增或构建不顺利?

选择最接近的情况查看参考排查项;如需人工协助,建议保留模板、引物、体系和电泳/qPCR 数据。

已勾选 0 / 4

PCR 无条带 / 条带弱

电泳后目标片段不可见,或条带明显弱于预期。

常见原因

  • 模板质量差或含抑制物
  • 引物设计或退火温度不合适
  • 酶体系不适合 GC-rich/长片段模板
  • 循环数、Mg2+ 或模板量不足

可参考的核对项

调整建议

  • 重新纯化模板或稀释抑制物
  • 更换热启动或高保真/GC-rich 专用酶
  • 优化退火温度和循环数
  • 准备阳性对照和新鲜 dNTP/Mix

我们的建议

对照核对项自查后若仍存疑,请保留样本类型、模板质量、引物序列、酶体系、循环条件和代表性结果,便于进一步协助。

推荐从“进阶分子生物学初购组合”开始,重点补高保真酶、模板纯化和对照体系。

相关产品与资料

支持与下一步

还需要查阅什么?

PCR/qPCR、克隆、转染指南、免费开源工具与公共数据库;选型与材料清单请回到上方工作台模块。

常见问题

第一次做 PCR/qPCR 先买什么?

先准备核酸提取、PCR/qPCR Mix、引物、无核酸酶水、PCR 管板、滤芯吸头、电泳和对照材料。

qPCR 重复孔差异大先查什么?

先看加样、板膜密封、气泡、熔解曲线、NTC 和模板质量,再调整引物、反转录和 Mix。

克隆项目如何降低失败率?

优先确认载体图谱、插入片段纯度、连接/组装比例、感受态效率、抗性筛选和测序验证。