实验流程

从样本到显影怎么走?

按步骤核对关键项,查看每步产出、条带定量工具与相关产品入口。

样本裂解与定量

选择裂解液、抑制剂和 BCA 试剂,确认上样量一致。

核对项

  • 样本来源和处理组已记录
  • 裂解液匹配细胞/组织类型
  • 蛋白酶或磷酸酶抑制剂现用现加
  • BCA 标准曲线和上样量已确认

本步产出

  • 统一浓度的蛋白样本
  • 可追溯的样本处理记录
  • 可用于后续复购的裂解和定量清单
选型决策

跑 WB 前先确认什么?

对照下列决策点缩小抗体与试剂范围,再至产品中心筛选或查看分级选购建议。

1

一抗是否已验证 WB

优先选择明确标注 WB 应用、样本物种和文献引用的抗体。

2

目标蛋白丰度

低丰度目标建议搭配高灵敏 ECL、低背景封闭液和阳性对照。

3

膜材与转膜条件

按分子量选择 PVDF 或 NC 膜,并记录转膜条件便于复购对照。

4

二抗与封闭体系

二抗宿主需与一抗来源匹配;背景高时可换低背景封闭液或交叉吸附二抗。

5

复购是否需要批次备注

关键项目建议保留品牌、货号、批号或近批次需求,便于数据可比。

实验材料准备助手

Western Blot 材料准备

告诉我们样本量与跑胶安排,我们为您估算通用耗材与常备器材;一抗、二抗等核心试剂请自行选购。

实验条件

用于补充场景判断;不确定时保持默认即可。

样本类型

检测目标

实验阶段

基础信息

填写样本量与跑胶参数,我们会即时更新耗材与器材用量估算。

单胶可跑样本

8 个

检测目标数

2 个

预计胶数

2 块

预计膜数

2 张

材料准备清单

25
  1. 1

    预制 SDS-PAGE 胶(浓度按分子量选择)

    2

    每胶预留 2 个泳道用于 Marker/对照;大分子量建议低浓度胶。

  2. 2

    SDS-PAGE 电泳缓冲液(Running buffer)

    1

    10× 浓缩或预制液;每块胶约 1 L 1× 工作液。

  3. 3

    转膜缓冲液(Transfer buffer)

    1

    湿转/半干转按方法选择;含甲醇配方需现配现用。

  4. 4

    PVDF 膜(0.45 μm,需甲醇预活化)

    2

    低分子量或磷酸化蛋白也可选 NC 膜;按每胶一张估算。

  5. 5

    转膜滤纸(Whatman 3MM 或同等)

    8

    湿转 sandwich 每层 2 张,按转膜次数预留。

  6. 6

    转膜海绵垫 / 纤维垫

    1

    老化或压痕明显时更换,保证转膜压力均匀。

  7. 7

    预染蛋白 Marker(Broad/Plus)

    1

    每胶至少 1 个 Marker 泳道,用于分子量对照。

  8. 8

    2× SDS 上样缓冲液 + 还原剂(DTT/β-ME)

    1

    煮样 95–100°C 5 min;还原剂现加现用。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手 WB 初购组合

适合第一次搭建 Western Blot 体系的实验室,重点补齐基础试剂和常用耗材。

必买

  • WB 一抗
  • HRP 偶联二抗
  • ECL 发光液
  • PVDF 膜
  • 预染蛋白 Marker

推荐配置

  • RIPA 裂解液
  • BCA 蛋白定量试剂盒
  • 封闭液
  • TBST 洗液
  • 转膜缓冲液

可选升级

  • 高灵敏 ECL
  • 预制胶
  • 转膜套装

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

结果不理想?

选择最接近的情况查看参考排查项;如需人工协助,欢迎随时联系我们。

已勾选 0 / 4

条带弱 / 没有条带

曝光后目标条带很弱,或内参正常但目标蛋白不可见。

常见原因

  • 目标蛋白丰度低或样本裂解不充分
  • 一抗不适用于 WB 或稀释比例过高
  • 转膜效率不足,特别是高分子量蛋白
  • ECL 灵敏度不够或底物失效

可参考的核对项

调整建议

  • 优先补充高验证等级一抗和阳性对照
  • 低丰度目标改用高灵敏 ECL
  • 高分子量蛋白延长转膜或调整膜材
  • 加入蛋白酶/磷酸酶抑制剂保护样本

我们的建议

对照核对项自查后若仍存疑,请保留目标蛋白、抗体信息、曝光图或关键操作条件,便于我们进一步协助。

推荐从“进阶 WB 初购组合”开始,重点补一抗验证、阳性对照和高灵敏显影。

相关产品与资料

支持与下一步

还需要查阅什么?

操作指南、免费开源工具与支持入口;选型与材料清单请回到上方工作台模块。

常见问题

第一次做 WB 应该先买什么?

先对照上方「实验流程」与「选型决策」,补齐一抗、二抗、ECL、膜、Marker、裂解液、BCA、封闭液和 TBST。

复购时如何控制成本?

优先补 ECL、膜、二抗、TBST 等消耗品;已验证一抗建议保持品牌和批次备注。

低丰度蛋白怎么选?

选择高特异性一抗、高灵敏 ECL、低背景封闭体系,并增加阳性对照;可参考疑难协助中的条带弱场景。