实验流程

从靶点设计到功能验证怎么走?

按步骤核对 sgRNA 设计、递送筛选、基因型鉴定和功能验证。

靶点与 sgRNA 设计

明确编辑目标、转录本、外显子区域和 PAM 条件,优先设计多个候选 sgRNA。

核对项

  • 基因编号和转录本已确认
  • 编辑区域避开关键重复序列
  • 候选 sgRNA 脱靶风险已评估
  • 阳性/阴性对照已规划

本步产出

  • 候选 sgRNA 列表
  • 脱靶预测记录
  • 引物和验证策略

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选型决策

CRISPR 项目前先确认什么?

对照编辑方式、递送体系、筛选策略、单克隆需求和验证层级,形成可执行方案。

1

选择 KO、KI 还是调控

敲除、敲入、CRISPRi/a 和碱基编辑对载体、筛选和验证要求不同。

2

递送方式如何确定

难转染细胞优先评估电转、病毒或 RNP;普通细胞可先做质粒条件摸索。

3

是否需要单克隆

机制研究通常需要单克隆;筛选或短期表型可先使用混池细胞评估。

4

如何降低脱靶风险

使用多 sgRNA、脱靶预测、测序验证和救援实验提高结论可靠性。

实验材料准备助手

分子生物学材料准备

告诉我们样本量、反应批次和靶标/构建数量,我们为您整理核酸提取、PCR/qPCR、反转录、电泳、纯化、克隆和无核酸酶耗材建议。

实验条件

用于完善材料配置和质控判断;暂不确定时可保留默认设置。

模板类型

实验类型

实验阶段

基础信息

填写细胞批次、靶标数量和编辑方式,用于整理 CRISPR 递送、筛选和验证材料。

实验批次

5 批

检测靶标

2 个

基础反应

48 个

总预估反应

67 个

材料准备清单

14
  1. 1

    DNA / PCR 产物提取纯化试剂盒

    1

    按 24 个样本估算;RNA 项目需全程 RNase-free 操作。

  2. 2

    PCR Master Mix / DNA Polymerase

    1

    按约 67 个反应估算,已包含对照和 15% 预留。

  3. 3

    引物 / 探针(按靶标或构建分别设计)

    2 对/套

    按 2 个靶标/构建估算;qPCR 建议同时确认扩增效率和熔解曲线。

  4. 4

    Nuclease-free 水

    1

    PCR/qPCR、反转录、引物稀释和阴性对照均需使用。

  5. 5

    滤芯吸头(10 / 200 / 1000 μL)

    1

    用于降低气溶胶污染;PCR/qPCR 建议固定专区使用。

  6. 6

    PCR 管 / 8 联管 / PCR 板

    1

    需匹配 PCR 仪模块规格。

  7. 7

    琼脂糖、凝胶染料和电泳缓冲液

    1

    用于终点 PCR、克隆片段和纯化前后确认。

  8. 8

    DNA 分子量标准 / Ladder

    1

    按片段大小选择 100 bp、1 kb 或宽范围 Marker。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手CRISPR 基因编辑初购组合

适合首次建立实验流程的团队,重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。

必买

  • Cas9 或 Cas 相关表达载体
  • sgRNA 合成或克隆试剂
  • 转染试剂
  • 抗性筛选试剂
  • PCR 验证试剂

推荐配置

  • 测序引物
  • 单克隆筛选耗材
  • 基因型鉴定试剂
  • 细胞培养试剂
  • 阳性和阴性对照载体

可选升级

  • RNP 电转体系
  • HDR 供体模板
  • 脱靶验证方案

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

编辑效率或克隆筛选不顺利?

选择最接近的情况,查看常见原因、核对项和调整建议。

已勾选 0 / 4

编辑效率低

PCR 或测序显示 indel 比例低,药筛后阳性细胞不足。

常见原因

  • sgRNA 活性不足
  • 递送效率低
  • 细胞状态不佳
  • Cas 表达或 RNP 条件不合适

核对项

调整建议

  • 更换 sgRNA 或递送方式
  • 优化细胞密度和转染比例
  • 使用富集标记或药筛
  • 改用 RNP 或病毒递送

处理建议

建议保留 sgRNA 序列、递送条件、筛选曲线、测序结果、克隆来源和功能验证原始记录。

建议补齐多个 sgRNA、递送试剂、筛选材料和编辑效率检测工具。

相关产品与资料

常见问题

CRISPR 项目最先确认什么?

先确认编辑目标、细胞类型、递送方式、筛选策略和验证层级。

是否一定要做单克隆?

机制研究通常建议筛单克隆;初筛或短期表型可先用混池细胞评估。

编辑结果如何判断可靠?

建议结合测序、蛋白/RNA 验证、多 sgRNA、多克隆和必要的 rescue 实验。