实验流程

从样本前处理到 EV 表征怎么走?

按步骤核对样本来源、分离富集、marker 表征和功能验证。

样本来源与前处理

明确细胞培养上清、血清、血浆、尿液或组织液来源,并控制采集和保存条件。

核对项

  • 样本来源和处理时间已记录
  • 培养体系已避免外源 EV 干扰
  • 离心、过滤和冻融次数可追溯
  • 低吸附耗材已准备

本步产出

  • 可追溯样本记录
  • 前处理 SOP
  • 污染控制清单

相关产品/工具

细胞培养试剂低吸附耗材
选型决策

EV 项目前先确认什么?

对照样本类型、分离方法、纯度要求、归一化策略和下游检测方式。

1

样本类型决定分离方案

培养上清和体液样本污染组成不同,应分别规划前处理和富集方法。

2

纯度还是回收率优先

功能实验常关注回收量,组学或机制验证更强调纯度和污染控制。

3

如何做 marker 组合

建议设置阳性 EV marker、阴性污染 marker 和样本来源相关标志物。

4

结果如何规范记录

记录样本来源、分离参数、粒径浓度、marker、归一化方式和数据版本。

实验材料准备助手

流式细胞术材料准备

告诉我们样本量、上机批次和 panel marker 数,我们为您整理抗体、死活染、补偿/FMO、流式管、滤网与样本制备建议。

实验条件

用于完善材料配置和质控判断;暂不确定时可保留默认设置。

样本类型

Panel 类型

实验阶段

基础信息

填写样本来源、批次数量和下游用途,用于整理 EV 分离、表征和功能验证材料。

上机批次

3 批

Panel marker

2 个

预计染色管

28 管

对照管

4 管

材料准备清单

14
  1. 1

    流式验证抗体(按 marker 分别选型)

    2

    按 2 个 marker 估算;需确认 Flow/FCM 应用、克隆号和荧光素。

  2. 2

    死活染料(Fixable viability dye 或 PI/7-AAD)

    1

    用于排除死细胞;固定通透实验需选择 fixable 版本。

  3. 3

    FACS Buffer / 染色缓冲液

    1

    常用 PBS + BSA/FBS + EDTA;用于染色、洗涤和重悬。

  4. 4

    流式管 / 5 mL 圆底管

    1

    按样本、单染补偿和对照共约 28 管估算。

  5. 5

    细胞滤网(40/70 μm)

    1

    上机前过滤单细胞悬液,降低聚团和堵针风险。

  6. 6

    补偿微球 / 单染补偿材料

    2

    每个荧光通道建议准备单染补偿,复杂 panel 尤其必要。

  7. 7

    FMO / 同型对照材料

    1

    用于判断门控边界和非特异背景;关键 marker 优先设置 FMO。

  8. 8

    Fc Block

    1

    免疫细胞样本建议加入,降低 Fc 受体介导的非特异结合。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手细胞外囊泡研究初购组合

适合首次建立实验流程的团队,重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。

必买

  • 无外泌体血清或替代培养体系
  • 超速离心或沉淀富集试剂
  • 过滤耗材
  • EV marker 抗体
  • 蛋白定量试剂

推荐配置

  • NTA/qNano 样本耗材
  • WB 验证试剂
  • ELISA 检测试剂盒
  • RNA 提取试剂
  • 低吸附管

可选升级

  • 免疫捕获磁珠
  • 尺寸排阻柱
  • TEM/纳米流式验证方案

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

EV 回收、纯度或功能读数异常?

选择最接近的情况,查看常见原因、核对项和调整建议。

已勾选 0 / 4

EV 回收量低

粒子浓度低,蛋白量不足,无法完成后续验证或功能实验。

常见原因

  • 起始样本量不足
  • 细胞状态或培养时间不合适
  • 富集方法回收率低
  • 冻融或转移损失

核对项

调整建议

  • 增加起始样本量
  • 优化收集时间窗
  • 减少转移和冻融
  • 改用更适合样本的富集方法

处理建议

建议保留样本来源、分离参数、粒径浓度、marker 结果、归一化方式和受体细胞状态记录。

建议补齐低吸附耗材、富集试剂和样本处理记录模板。

相关产品与资料

常见问题

EV 项目最先确认什么?

先确认样本来源、起始体积、分离方式、下游用途和表征指标。

外泌体和 EV 能否混用?

建议优先使用细胞外囊泡/EV 表述,并根据分离和表征结果谨慎描述亚型。

是否只做一个 marker 就够?

不建议。通常需要阳性 marker、阴性污染 marker、粒径浓度和形态或功能读数共同支持。