染色流程

从切片到成像怎么走?

按步骤核对关键项,查看每步产出、定量记录与免费开源图像分析工具。

样本与切片确认

明确 FFPE 或冰冻切片、固定条件、组织来源和目标蛋白定位。

核对项

  • 组织固定方式和时间已记录
  • 切片厚度与防脱片需求已确认
  • 目标蛋白定位和阳性组织已查证
  • 阴性对照和同型对照需求已规划

本步产出

  • 样本条件记录
  • 对照切片需求
  • 基础耗材清单
选型决策

做 IHC 前先确认什么?

对照下列决策点缩小抗体、修复液和检测系统范围,再至产品中心筛选或查看分级选购建议。

1

抗体是否验证 IHC 应用

优先选择明确标注 IHC、IHC-P 或 IHC-Fr,并有组织图片或文献支持的抗体。

2

FFPE 还是冰冻切片

FFPE 通常需要抗原修复;冰冻切片更关注固定方式、组织形态和荧光背景。

3

检测系统和显色方式

明场 IHC 常用 HRP-DAB;共定位或多重检测可考虑荧光二抗或多重染色体系。

4

阳性和阴性对照是否齐全

弱信号或新靶点项目需要阳性组织对照;背景判断需设置无一抗或同型对照。

5

是否需要评分一致性

大样本或临床队列建议锁定批次、桥接对照切片和统一成像参数。

实验材料准备助手

IHC 免疫组化材料准备

告诉我们切片量、靶标数量和样本类型,我们为您整理一抗、修复、封闭、检测、显色与封片相关建议。

实验条件

用于判断修复、检测系统和背景控制;不确定时保持默认即可。

样本类型

检测方式

实验阶段

基础信息

填写切片量与靶标数量,我们会即时更新染色耗材与试剂建议。

染色批次

2 批

检测靶标

2 个

染色运行

4 次

对照切片

4 张

材料准备清单

18
  1. 1

    IHC 验证一抗(按靶标分别选型)

    2

    按 2 个靶标估算;优先确认 IHC/IHC-P/IHC-Fr、组织图片和阳性组织。

  2. 2

    HRP 聚合物检测系统 / 匹配二抗

    1

    需匹配一抗宿主;明场 IHC 常用 HRP-DAB,荧光体系请换荧光二抗。

  3. 3

    防脱载玻片

    1

    按样本切片和对照切片共约 16 张估算,高温修复建议使用防脱片。

  4. 4

    抗原修复液(pH6 / pH9 视抗体选择)

    1

    FFPE 样本常用;弱信号或背景高时建议比较不同 pH 条件。

  5. 5

    内源性过氧化物酶封闭液

    1

    HRP-DAB 体系建议纳入,减少组织内源酶背景。

  6. 6

    封闭液 / 抗体稀释液

    1

    用于降低非特异染色,建议与检测系统兼容。

  7. 7

    PBS/TBS 洗液

    1

    脱蜡后洗涤、抗体孵育后洗涤和显色前后均需使用。

  8. 8

    DAB 显色液

    1

    显色时间需固定;低丰度靶点可考虑高灵敏检测系统。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手 IHC 初购组合

适合第一次做免疫组化染色的用户,重点补齐切片、修复、封闭、检测和显色材料。

必买

  • IHC 验证一抗
  • HRP 聚合物检测系统
  • 抗原修复液
  • DAB 显色液
  • 苏木素复染液

推荐配置

  • 封闭液
  • PBS/TBS 洗液
  • 防脱载玻片
  • 封片剂
  • 阳性组织对照

可选升级

  • 预稀释 IHC 一抗
  • 自动染色机兼容试剂
  • 多重 IHC 检测体系

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

染色结果不理想?

选择最接近的情况查看参考排查项;如需人工协助,建议保留切片类型、抗体信息和染色图片。

已勾选 0 / 4

染色弱 / 无信号

阳性区域信号很淡,或对照组织也没有明确染色。

常见原因

  • 一抗未验证 IHC 或稀释过高
  • 抗原修复条件不足
  • 组织固定过度或抗原丢失
  • 检测系统灵敏度不够或底物失效

可参考的核对项

调整建议

  • 更换 IHC 验证等级更高的一抗
  • 补充阳性组织对照和高灵敏检测系统
  • 优化热修复时间和 pH
  • 更换新鲜 DAB 或底物体系

我们的建议

对照核对项自查后若仍存疑,请保留样本固定方式、抗体货号、修复条件、显色时间和代表性图片,便于进一步协助。

推荐从“进阶 IHC 初购组合”开始,重点补 IHC 验证一抗、对照切片和修复体系。

相关产品与资料

支持与下一步

还需要查阅什么?

IHC 指南、免费开源图像工具与支持入口;选型与材料清单请回到上方工作台模块。

常见问题

IHC 一抗怎么选?

优先选择明确标注 IHC/IHC-P/IHC-Fr 的抗体,并核对组织物种、阳性组织图片和文献记录。

FFPE 一定要抗原修复吗?

多数 FFPE 样本需要热修复;修复液 pH 和时间要按抗体说明书或预实验优化。

背景高先改什么?

先设置无一抗对照,逐步调整一抗浓度、封闭、内源酶封闭和洗涤条件,避免一次改太多变量。