实验流程

从组织切片到空间数据怎么走?

按步骤核对样本质控、预染、空间检测和图像配准分析。

样本选择与切片质控

确认 FFPE、冰冻或新鲜组织类型,评估形态、脱片风险和核酸质量。

核对项

  • 样本保存方式明确
  • 切片厚度符合要求
  • 组织完整且无明显脱片
  • RNA 或抗原保留情况可评估

本步产出

  • 合格组织切片
  • 样本保存和切片记录
  • 前处理材料清单
选型决策

空间生物学项目前先确认什么?

对照样本类型、空间分辨率、检测方式和图像分析要求,确定实验路径。

1

样本类型如何选择

FFPE 便于存档样本研究,冰冻样本更适合部分 RNA 质量要求高的检测。

2

空间分辨率需要多高

按组织问题选择区域级、spot 级或单细胞/亚细胞级方案,避免过度设计。

3

是否需要多重蛋白验证

空间转录结果常需 IHC、IF 或流式验证关键细胞群和 marker。

4

图像分析如何组织

建议在实验前确定 ROI 标注规则、图像格式和空间分析工具。

实验材料准备助手

免疫荧光材料准备

告诉我们样本量、荧光通道和实验阶段,我们为您整理一抗、荧光二抗、核染、封闭通透、抗淬灭封片与成像材料。

实验条件

用于完善材料配置和质控判断;暂不确定时可保留默认设置。

样本类型

通道规划

实验阶段

基础信息

填写样本类型、切片数量和检测目标,用于整理空间检测和成像相关材料。

染色批次

2 批

荧光通道

2 个

染色运行

4 次

对照样本

3 份

材料准备清单

16
  1. 1

    IF 验证一抗(按靶标分别选型)

    2

    按 2 个目标通道估算;优先确认 IF/ICC 或 IF-Fr 应用和阳性图像。

  2. 2

    荧光二抗(488/555/594/647 等)

    2

    需匹配一抗宿主和显微镜通道;多标实验建议交叉吸附二抗。

  3. 3

    DAPI / 核染料

    1

    用于核染和图像配准,注意避光保存和固定稀释比例。

  4. 4

    4% PFA 固定液或甲醇固定试剂

    1

    按抗原特性选择 PFA、甲醇或丙酮固定方式。

  5. 5

    通透液(Triton X-100 / saponin)

    1

    胞内或核内靶点需要通透;膜蛋白需谨慎选择强度。

  6. 6

    封闭液 / 抗体稀释液

    1

    用于降低二抗非特异结合,建议与二抗宿主和样本类型兼容。

  7. 7

    PBS/TBS 洗液

    1

    固定、通透、抗体孵育和核染后均需洗涤;多标实验建议足量准备。

  8. 8

    抗淬灭封片剂

    1

    保护荧光信号;共聚焦或长期保存建议选择抗淬灭版本。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手空间生物学初购组合

适合首次建立实验流程的团队,重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。

必买

  • 组织固定与包埋试剂
  • 切片耗材
  • 抗原修复液
  • 多重 IF 抗体
  • 封片与核染试剂

推荐配置

  • RNase-free 耗材
  • 荧光二抗
  • 抗淬灭封片剂
  • 组织自发荧光处理试剂
  • 图像质控材料

可选升级

  • 空间转录组前处理
  • 多重成像 panel
  • 组织透明化方案

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

空间检测或图像分析异常?

选择最接近的情况,查看常见原因、核对项和调整建议。

已勾选 0 / 4

RNA 或组织质量不足

切片形态不佳、RNA 完整性偏低,或空间检测信号整体偏弱。

常见原因

  • 固定或保存条件不合适
  • 切片时间和温控不稳定
  • RNase 污染
  • 样本坏死或降解

核对项

调整建议

  • 优化取材和保存流程
  • 使用新鲜切片或更合适样本类型
  • 加强 RNase 控制
  • 用预染确认可用区域

处理建议

建议保留样本保存方式、切片条件、预染图像、通道设置、ROI 标注和原始数据,便于后续排查。

建议优先补齐 RNase-free 耗材、切片质控和组织处理材料。

相关产品与资料

常见问题

空间项目先确认什么?

先确认样本类型、保存方式、切片质量、目标分辨率和是否需要 IHC/IF 预评估。

空间转录组是否仍需抗体验证?

通常需要。关键细胞群、marker 或区域差异建议通过 IHC、IF 或流式进行正交验证。

多重成像如何减少串色?

应设置单染和未染对照,提前核对光谱、滤光片、抗体滴定和曝光参数。