ELISpot / FluoroSpot 工作台
检测抗原特异性 T 细胞、B 细胞和细胞因子分泌细胞频率。
从细胞准备到 SFU 结果怎么走？
按步骤核对细胞状态、板材包被、刺激检测、spot 计数和质控结论。
ELISpot 项目前先确认什么？
对照 ELISA、FluoroSpot、细胞分离、刺激物和孔位设计，确定检测路线。
ELISA 材料准备
告诉我们样本类型、目标分子与项目规模，我们为您整理试剂盒、标准品、耗材与常备器材建议。
实验条件
用于完善材料配置和质控判断；暂不确定时可保留默认设置。
样本类型
检测目标
项目规模
基础信息
填写样本数量、检测因子和刺激条件，用于整理 ELISpot 板、抗体对、刺激物和对照材料。
单板可测样本
17 个
样本占用孔
90 孔
非样本孔/板
45 孔
需要 96 孔板
2 块
总占用孔数
180 孔
材料准备清单
共 22 项- 1
TNF alpha Human ELISA 试剂盒（96T）
2 盒按 30 个样本、3 复孔、Human TNF alpha、每板约 17 个样本估算。
- 2
96 孔酶标板（U 型/V 型，按试剂盒要求）
2 块若试剂盒已预包被，通常无需另购；自建体系或预实验需确认板型。
- 3
洗涤缓冲液（10× 浓缩液）
1 瓶按洗板次数预留；手工洗板建议配洗瓶或洗板机。
- 4
TMB 底物液
1 瓶单组分或 A/B 双液；若试剂盒已含足量可去除。
- 5
终止液（如 2M H₂SO₄）
1 瓶显色后终止反应；部分试剂盒已包含。
- 6
样本/标准品稀释液
1 瓶浓度未知或复杂样本建议额外准备 2–3 个稀释梯度。
- 7
封板膜（铝膜或塑料密封膜）
4 张包被、孵育过程防蒸发；每板建议至少 2 张。
- 8
移液吸头（10 μL，排枪/单道）
1 盒标准曲线与样本加样；按总孔数估算。
我该买什么？
选择您的经验阶段与采购目的，查看对应的必买清单与产品建议。
新手ELISpot / FluoroSpot初购组合
适合首次建立实验流程的团队，重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。
必买
- ELISpot 预包被或抗体对试剂盒
- PVDF ELISpot 板
- 细胞培养基
- 刺激物或肽库
- 检测抗体和显色底物
推荐配置
- PBMC 分离材料
- 阳性对照刺激物
- 阴性对照孔耗材
- 洗液和封闭液
- 无菌低吸附耗材
可选升级
- FluoroSpot 多指标检测
- 自动 spot 计数服务
- 抗原肽库和细胞亚群预富集
仅供参考，具体品牌与货号请至产品中心选型；不同实验室和样本情况可能有所不同。
ELISpot 背景或 spot 计数异常？
选择最接近的情况，查看常见原因、核对项和调整建议。
阴性背景高
未刺激孔 spot 多，背景扣除后阳性结果难以解释。
常见原因
- 细胞状态差或自发激活
- 洗涤不足
- 捕获/检测抗体浓度过高
- 培养基或血清背景影响
核对项
调整建议
- 优化细胞处理和休整时间
- 降低抗体浓度并加强洗涤
- 更换低背景培养体系
- 加入更多阴性对照
处理建议
建议保留细胞来源、活率、每孔细胞数、刺激物、孔位布局、显色时间、原始图像和 spot 计数规则。
建议补齐阴性对照、低背景培养材料、洗液和细胞状态质控材料。
相关产品与资料
相关指南与公共资源
ELISpot 报告规范、免疫表位资源、细胞分离、流式验证和 ELISA 相关场景。
常见问题
ELISpot 和 ELISA 怎么选？
ELISpot 统计分泌细胞频率，ELISA 定量上清总浓度；免疫功能细胞频率优先选 ELISpot。
ELISpot 前需要磁珠分选吗？
不是所有样本都需要。低丰度目标细胞、背景复杂或功能亚群研究时，可先用 untouched 负选或富集策略。
结果为什么要背景扣除？
未刺激孔代表自发分泌和背景信号，通常需要扣除后再计算 SFU、刺激指数和阳性判定。