实验流程

从样本摸底到下游实验怎么走?

按步骤核对样本状态、分选策略、磁珠分离、纯度活率验证和下游衔接。

样本制备与流式摸底

制备单细胞悬液,必要时先用小样本流式确认目标细胞比例和 marker 表达。

核对项

  • 细胞活率和浓度已记录
  • 红细胞、碎片和聚团已评估
  • 目标细胞 marker 和抗体克隆号明确
  • 是否需要先做流式摸底已判断

本步产出

  • 单细胞悬液质控记录
  • 目标细胞比例初判
  • 分选策略初稿
选型决策

磁珠分选前先确认什么?

对照目标细胞丰度、功能保留、去除需求和是否需要后续 FACS,确定正选或负选路线。

1

要保持细胞功能状态吗

后续做 ELISpot、培养或刺激实验时,优先考虑 untouched 负选,避免正选抗体影响目标细胞。

2

目标细胞是否低丰度

低丰度细胞建议先磁珠富集,再流式验证或 FACS 精分选,降低上机时间和样本损失。

3

只是去除污染细胞吗

红细胞、死细胞、粒细胞或 CD45 阳性/阴性细胞干扰明显时,可选择 depletion 路线。

4

是否还需要 FACS

磁珠适合粗富集和温和分离;需要极高纯度、多 marker 组合或亚群边界时,仍建议接 FACS。

实验材料准备助手

流式细胞术材料准备

告诉我们样本量、上机批次和 panel marker 数,我们为您整理抗体、死活染、补偿/FMO、流式管、滤网与样本制备建议。

实验条件

用于完善材料配置和质控判断;暂不确定时可保留默认设置。

样本类型

Panel 类型

实验阶段

基础信息

填写样本数量、目标 marker 和下游用途,用于整理磁珠分选、缓冲液、过滤和流式验证材料。

上机批次

3 批

Panel marker

2 个

预计染色管

28 管

对照管

4 管

材料准备清单

14
  1. 1

    流式验证抗体(按 marker 分别选型)

    2

    按 2 个 marker 估算;需确认 Flow/FCM 应用、克隆号和荧光素。

  2. 2

    死活染料(Fixable viability dye 或 PI/7-AAD)

    1

    用于排除死细胞;固定通透实验需选择 fixable 版本。

  3. 3

    FACS Buffer / 染色缓冲液

    1

    常用 PBS + BSA/FBS + EDTA;用于染色、洗涤和重悬。

  4. 4

    流式管 / 5 mL 圆底管

    1

    按样本、单染补偿和对照共约 28 管估算。

  5. 5

    细胞滤网(40/70 μm)

    1

    上机前过滤单细胞悬液,降低聚团和堵针风险。

  6. 6

    补偿微球 / 单染补偿材料

    2

    每个荧光通道建议准备单染补偿,复杂 panel 尤其必要。

  7. 7

    FMO / 同型对照材料

    1

    用于判断门控边界和非特异背景;关键 marker 优先设置 FMO。

  8. 8

    Fc Block

    1

    免疫细胞样本建议加入,降低 Fc 受体介导的非特异结合。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手免疫磁珠分选初购组合

适合首次建立实验流程的团队,重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。

必买

  • 目标细胞分选磁珠
  • 分选缓冲液
  • Fc Block
  • 细胞过滤器
  • 低吸附离心管

推荐配置

  • 红细胞裂解液
  • 死细胞去除试剂
  • 活率染料
  • 流式验证抗体
  • 计数耗材

可选升级

  • untouched 负选试剂盒
  • rare cell enrichment 方案
  • 磁珠预富集后 FACS 精分选

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

磁珠分选纯度或回收率不理想?

选择最接近的情况,查看常见原因、核对项和调整建议。

已勾选 0 / 4

纯度不足

分选后目标细胞比例提升有限,流式质控仍显示大量杂细胞。

常见原因

  • marker 选择不准确
  • 磁珠或抗体用量不足
  • 样本团块和碎片多
  • 洗涤或磁分离时间不充分

核对项

调整建议

  • 调整 marker 或组合去除策略
  • 优化磁珠用量和孵育条件
  • 增加过滤和 Fc Block
  • 低丰度目标先富集再 FACS

处理建议

建议保留分选前后流式比例、细胞数、活率、marker、磁珠用量、孵育时间和洗涤条件。

建议优先补齐流式验证抗体、Fc Block、过滤器和合适的富集或去除磁珠。

相关产品与资料

支持与下一步

相关指南与公共资源

细胞 marker 参考、公共细胞图谱、流式质控、单细胞建库和 ELISpot 功能检测入口。

常见问题

正选和负选怎么选?

需要最高富集效率时可考虑正选;后续做功能实验、培养或刺激检测时优先考虑 untouched 负选。

磁珠分选能替代 FACS 吗?

磁珠适合温和富集或去除,FACS 适合多 marker、高纯度和亚群边界明确的精分选;两者常组合使用。

是否一定要先流式摸底?

不是必须,但样本复杂、目标细胞低丰度或 marker 不确定时,先做小样本流式摸底能显著降低路线选择风险。