实验流程

从样本到单细胞数据怎么走?

按步骤核对样本处理、悬液质控、分选富集和数据分析准备。

样本采集与组织解离

根据组织类型选择机械剪切、酶消化和温控条件,减少应激和细胞损失。

核对项

  • 样本离体时间已记录
  • 解离酶适配组织类型
  • 消化时间和温度可追溯
  • RNase 污染和细胞应激已控制

本步产出

  • 样本处理记录
  • 初步单细胞悬液
  • 解离条件和复购材料清单
选型决策

单细胞项目前先确认什么?

对照样本适配性、富集方式、标签策略和公共参考资源,形成可执行的前处理方案。

1

样本是否适合做单细胞

优先评估离体时间、组织纤维化程度、细胞活率和目标细胞比例。

2

是否需要分选或富集

低丰度细胞群、免疫细胞亚群或特定 marker 项目建议提前规划 FACS 或磁珠富集。

3

是否加入蛋白或标签信息

CITE-seq 或样本标签方案需提前确认 oligo-tag 抗体、滴定和对照。

4

参考图谱如何选择

公共细胞图谱、已发表数据和项目内对照可提高细胞注释可靠性。

实验材料准备助手

流式细胞术材料准备

告诉我们样本量、上机批次和 panel marker 数,我们为您整理抗体、死活染、补偿/FMO、流式管、滤网与样本制备建议。

实验条件

用于完善材料配置和质控判断;暂不确定时可保留默认设置。

样本类型

Panel 类型

实验阶段

基础信息

填写样本数量、目标细胞群和检测类型,用于整理单细胞样本制备材料。

上机批次

3 批

Panel marker

2 个

预计染色管

28 管

对照管

4 管

材料准备清单

14
  1. 1

    流式验证抗体(按 marker 分别选型)

    2

    按 2 个 marker 估算;需确认 Flow/FCM 应用、克隆号和荧光素。

  2. 2

    死活染料(Fixable viability dye 或 PI/7-AAD)

    1

    用于排除死细胞;固定通透实验需选择 fixable 版本。

  3. 3

    FACS Buffer / 染色缓冲液

    1

    常用 PBS + BSA/FBS + EDTA;用于染色、洗涤和重悬。

  4. 4

    流式管 / 5 mL 圆底管

    1

    按样本、单染补偿和对照共约 28 管估算。

  5. 5

    细胞滤网(40/70 μm)

    1

    上机前过滤单细胞悬液,降低聚团和堵针风险。

  6. 6

    补偿微球 / 单染补偿材料

    2

    每个荧光通道建议准备单染补偿,复杂 panel 尤其必要。

  7. 7

    FMO / 同型对照材料

    1

    用于判断门控边界和非特异背景;关键 marker 优先设置 FMO。

  8. 8

    Fc Block

    1

    免疫细胞样本建议加入,降低 Fc 受体介导的非特异结合。

分级选购建议

我该买什么?

选择您的经验阶段与采购目的,查看对应的必买清单与产品建议。

新手单细胞组学初购组合

适合首次建立实验流程的团队,重点是补齐关键试剂、基础耗材和质量控制材料。

必买

  • 组织解离酶
  • 细胞过滤器
  • 死细胞去除试剂
  • 活率染料
  • 低吸附耗材

推荐配置

  • FACS Buffer
  • 红细胞裂解液
  • 流式抗体
  • RNA 保护试剂
  • 单细胞样本质控耗材

可选升级

  • CITE-seq 抗体
  • 细胞富集试剂
  • 多样本标签策略

仅供参考,具体品牌与货号请至产品中心选型;不同实验室和样本情况可能有所不同。

疑难协助

单细胞样本质量异常?

选择最接近的情况,查看常见原因、核对项和调整建议。

已勾选 0 / 4

细胞活率低

建库前活细胞比例不足,死细胞和碎片明显增加。

常见原因

  • 离体时间过长或温控不当
  • 酶消化过强
  • 离心和吹打过度
  • 样本坏死或炎症程度高

核对项

调整建议

  • 缩短处理时间并优化低温流程
  • 降低酶消化强度
  • 加入死细胞去除步骤
  • 必要时评估单核测序方案

处理建议

建议保留样本来源、离体时间、解离条件、活率、细胞浓度、分选门控和建库前质控记录,便于定位问题。

建议优先补齐活率染料、过滤器、死细胞去除和温控处理材料。

相关产品与资料

常见问题

单细胞项目最先确认什么?

先确认样本类型、离体时间、目标细胞比例、活率要求和是否需要分选或富集。

活率不足是否还能继续?

需结合平台要求判断;活率明显不足时建议优化解离流程、去除死细胞,或评估单核测序方案。

公共图谱有什么作用?

公共图谱可辅助细胞类型注释、marker 验证和结果解释,但仍需结合本项目样本和实验设计。