磁珠分选 (MACS) 实验指南
中级磁珠分选·2-4小时
磁性激活细胞分选（MACS）技术，利用偶联抗体的磁性微珠富集或去除特定细胞群体。适用于流式前的样本制备、免疫学研究、细胞治疗等。
1实验步骤
- 1样本准备：收集细胞（悬浮或贴壁细胞），用 PBS + 0.5% BSA + 2mM EDTA 缓冲液重悬
- 2细胞计数：调整细胞浓度至 10⁷-10⁸ cells/mL
- 3磁珠标记：加入偶联抗体的磁性微珠（通常 10μL/10⁷ cells），轻轻混匀，4℃ 孵育 15-30 分钟
- 4洗涤：加入缓冲液洗涤，300g 离心 5 分钟，弃上清
- 5分选柱准备：将 MS 或 LS 分选柱放置于磁力架上，加入缓冲液平衡柱子
- 6上样：将细胞悬液加入分选柱，让未标记细胞流穿（阴性组分）
- 7洗涤：用缓冲液洗涤柱子 3 次，每次收集洗穿液
- 8洗脱：移除磁场，加入缓冲液，用柱子配套的活塞或离心管收集标记细胞（阳性组分）
- 9可选：对于高表达目标抗原的细胞，可用预分选柱进行富集
- 10对于需要去除特定细胞的情况（如 RBC、Dead cells），先进行阴性分选
- 11细胞计数：收集完成后用血球计数板或自动细胞计数仪测定细胞浓度
- 12质控：取少量样本进行流式检测，验证分选纯度（应 >90%）
注意事项
- 整个操作保持 4℃ 或冰上，防止非特异性结合和细胞死亡
- 缓冲液中加入 BSA 和 EDTA 可减少细胞结团和非特异性结合
- 细胞浓度不要过高（<10⁸ cells/mL），否则会导致柱子堵塞
- 抗体和磁珠用量需根据细胞数量和抗原表达水平优化
- 柱子选择：MS 柱适合少量细胞（<10⁷），LS 柱适合中等量细胞（<10⁸）
- 阳性分选时移除柱子前先静置 1 分钟，提高回收率
- 分选后尽快进行下游实验，避免细胞活性下降
- 对于低表达抗原，可考虑使用亲和性更高的微珠（如 αCD25 微珠）